CLEM สำหรับวิทยาศาสตร์ชีวภาพ

CLEM คืออะไร

กล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนแบบแสงและกล้องจุลทรรศน์แบบคู่ขนาน (CLEM) เป็นวิธีการสังเกตและวิเคราะห์ที่มีประสิทธิภาพ โดยบูรณาการข้อมูลของตัวอย่างเดียวกันที่ได้จากกล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสง (LM) และกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนแบบส่องผ่าน (TEM) หรือกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนแบบส่องกราด (SEM) ข้อดีของทั้งสองวิธีนี้สามารถนำไปใช้สังเกตและวิเคราะห์ได้

กรุณาคลิกที่นี่และตรวจสอบแต่ละวิธีของ CLEM สำหรับ Life Science

ขัดเงา CLEM / งานกัด CLEM

เป็นวิธีการสังเกตภาพที่มีขอบเขตการมองเห็นเดียวกันกับภาพ LM (ภาพออปติคัล) โดยใช้กล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนแบบส่องกราด โดยให้แสงส่องไปที่พื้นผิวด้วยการขัดหรือบดไอออน เป็นต้น สามารถสังเกตภาพทั้งหมดหรือภาพการย้อมเรืองแสงของเซลล์ได้โดยใช้ LM จากนั้นจึงสังเกตโครงสร้างโดยละเอียดภายในเซลล์โดยใช้ SEM คุณสมบัติเด่นคือความสามารถในการสังเกตอย่างง่ายและครอบคลุม การใช้ตัวยึดการเชื่อมต่อแบบพิเศษทำให้จัดตำแหน่งได้ง่าย

เวิร์กโฟลว์ CLEM / การกัด CLEM ของโปแลนด์

เซลล์ได้รับการเพาะเลี้ยงบนจานที่มีเครื่องหมายและตรึงไว้ล่วงหน้าและย้อมสี หลังจากการสังเกต LM ตัวอย่างที่เตรียมจะถูกแนบกับตัวจับและพิกัดได้รับการยืนยัน พื้นผิวที่สังเกตจะถูกเปิดเผยโดยการขัดและการบดด้วยไอออน และสังเกตโดยใช้ SEM

บนชิป CLEM

นี่เป็นวิธีการสังเกตชิ้นงานที่บางมากบนฐานชิ้นงานเดียวกัน (ชิปหน้าต่าง SiN) โดยใช้ทั้งกล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสง (LM) และกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนแบบส่องผ่าน (TEM) เนื่องจากไม่มีกระบวนการใดที่จะทำให้ชิ้นงานผิดรูประหว่างการสังเกตด้วย LM และ TEM จึงสามารถซ้อนทับได้อย่างแม่นยำสูง วิธีนี้ยังสามารถใช้กับสนามวัสดุได้อีกด้วย

เวิร์กโฟลว์ CLEM บนชิป

ชิป CLEM บนชิปใช้สำหรับวางชิ้นงานส่วนที่บางเป็นพิเศษที่เตรียมไว้สำหรับ TEM ลงบนชิปหน้าต่าง SiN สามารถติดชิปหน้าต่าง SiN เข้ากับตัวจับยึดสำหรับกล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสง และ TEM โดยใช้รีเทนเนอร์พิเศษ การเปลี่ยนการใช้รีเทนเนอร์พิเศษเป็นรีเทนเนอร์ LM และรีเทนเนอร์ TEM ทำให้สามารถสังเกตการณ์ LM・TEM ได้อย่างง่ายดาย
เนื่องจากสามารถสังเกตส่วนเดียวกันได้ จึงสามารถได้ความสัมพันธ์ที่แม่นยำสูงได้

ล.ล.ป.-ค.ล.ม.

Limitless Panorama (LLP) มีฟังก์ชันสำหรับนำเข้าภาพที่ถ่ายจากภายนอก เช่น ภาพที่ถ่ายด้วยกล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสง LLP สามารถจับคู่พื้นที่ที่สังเกตของ LLP กับพิกัดตัวอย่างของกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนแบบส่งผ่าน หลังจากจับคู่พิกัดของภาพสังเกตแต่ละภาพแล้ว จะมีการถ่ายรูปมอนทาจของพื้นที่ที่สังเกตโดย LM โดยใช้ TEM สามารถสังเกตได้ในช่วงกว้างด้วยความละเอียดสูง

เวิร์กโฟลว์ LLP-CLEM

เซลล์ที่เพาะเลี้ยงบนจานที่มีเครื่องหมายจะถูกตรึงไว้ล่วงหน้าและย้อมสี หลังจากการถ่ายภาพ LM พื้นที่เป้าหมายของตัวอย่างหลังจากการตรึงภายหลังและการฝังเรซินจะถูกตัดออกโดยใช้เครื่องหมายเป็นจุดสังเกต ส่วนที่บางมากของตัวอย่างจะถูกเตรียมโดยใช้อัลตราไมโครโทมและสังเกตโดยใช้ TEM
การจัดตำแหน่งจะดำเนินการโดยระบุจุดคุณลักษณะสามจุดขึ้นไปที่เหมือนกันระหว่างภาพ LM ที่ถ่ายและภาพ TEM ของภาพขยายต่ำ ระบุพื้นที่และดำเนินการสร้างภาพ LLP

ในเรซิน CLEM

ในเรซิน CLEM เป็นเทคนิคในการเตรียมส่วนที่บางมากหลังจากการย้อมเรืองแสงและการฝังเรซินบนชิ้นงาน ชุบชีวิตการเรืองแสง และสังเกตส่วนที่เหมือนกันโดยใช้กล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสงและกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอน (TEM/SEM) เพื่อชุบชีวิตการเรืองแสง จะใช้สารชุบชีวิตการเรืองแสง (สารละลาย TUK) ซึ่งสามารถสังเกตส่วนที่เหมือนกันได้ด้วยกล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสงและแบบอิเล็กตรอน ทำให้สามารถซ้อนทับภาพกล้องจุลทรรศน์แบบออปติคอลและแบบอิเล็กตรอนได้อย่างแม่นยำมาก

เวิร์กโฟลว์ CLEM ในเรซิน

ส่วนบางเฉียบจะถูกติดตั้งบนชิปหน้าต่าง SiN (สำหรับ TEM) หรือเวเฟอร์ Si หรือกระจกสไลด์ (สำหรับ SEM) ที่มีพื้นผิวเรียบ จากนั้นจึงใช้สารเรืองแสง (สารละลาย TUK) เพื่อตรวจสอบด้วยกล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสง ตามด้วยกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอน

CLEM หลากสี

อนุภาคซิลิกาอินทรีย์สามารถดัดแปลงได้หลายอย่าง เช่น การผสมสีย้อมเรืองแสงหรือการเติมโลหะหนัก อนุภาคซิลิกาอินทรีย์ที่มีสีย้อมเรืองแสงและโลหะหนักถูกนำเข้าไปในเซลล์ อนุภาคซิลิกาอินทรีย์ที่มีโลหะหนักหลายชนิดสามารถแยกแยะได้โดยการเพิ่มโลหะหนักเข้าไปผ่านการทำแผนที่ EDS ดังนั้น จึงสามารถสังเกตได้ในหลายสีไม่เพียงแต่ด้วยกล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสงเท่านั้น แต่ยังรวมถึงกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนด้วย นอกจากนี้ยังสามารถใช้สิ่งนี้เป็นเครื่องหมายเมื่อพื้นที่ที่สังเกตด้วยกล้องจุลทรรศน์เรืองแสงถูกสังเกตด้วยกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนอย่างละเอียด

เวิร์กโฟลว์ CLEM หลายสี

อนุภาคนาโนซิลิกาอินทรีย์ได้รับการดัดแปลง เช่น "การเรืองแสงสีเขียว + อนุภาคสีทอง" และ "การเรืองแสงสีแดง + อนุภาคเหล็ก" จากนั้นจึงนำอนุภาคเหล่านี้เข้าสู่เซลล์ที่เพาะเลี้ยง จากนั้นจึงสามารถยืนยันพื้นที่เดียวกันได้โดยใช้การสังเกตการเรืองแสงและการทำแผนที่ EDS

การแนะนำผลิตภัณฑ์ที่เกี่ยวข้อง