การวิเคราะห์ความไวสูงของโปรตีนที่สมบูรณ์โดยใช้ TOF เชิงเส้น

บทนำ

JMS-S3000 SpiralTOF มาพร้อม^TM มีเส้นทางการบินเฉพาะตัว 17 เมตรซึ่งนำเสนอระบบ MALDI-TOFMS ที่มีความละเอียดสูงสุดในปัจจุบัน อย่างไรก็ตาม ไอออนที่มีอายุสั้นมากหรือไอออนที่เกิดการแตกตัวโดยธรรมชาติระหว่างการบินไม่สามารถตรวจจับได้ด้วย SpiralTOF (หรือ TOF แบบสะท้อนกลับทั่วไป) เพื่อแก้ไขสถานการณ์นี้ SpiralTOF พร้อมตัวเลือก TOF แบบเชิงเส้นสามารถใช้สำหรับการวิเคราะห์โปรตีนที่สมบูรณ์ที่มีความไวสูงได้

ในงานนี้ เราจะสาธิตการวัดโปรตีนที่สมบูรณ์โดยใช้ตัวเลือก Linear TOF สำหรับระบบ JEOL SpiralTOF

การทดลอง

มาตรฐานโปรตีนได้รับมาจาก Sigma-Aldrich

เปปซิน (เยื่อเมือกกระเพาะของสุกร) P-6887
อัลบูมิน (ซีรั่มวัว) A8471
โคแนลบูมิน (ไข่ขาวไก่) C0755
IgG (ซีรั่มวัว), I5506

ตัวอย่างมาตรฐานโปรตีนถูกละลายในน้ำที่ความเข้มข้น 1 pmol/µL ใช้กรดซินาพินิก (SA) เป็นเมทริกซ์และละลายในน้ำ 1:1 / อะซีโตไนไตรล์ที่มีกรดไตรฟลูออโรอะซิติก 0.1% จากนั้นผสมสารละลายมาตรฐานโปรตีนและสารละลาย SA เข้าด้วยกันในอัตราส่วน 1:1 ตามปริมาตร จากนั้นวางส่วนผสมนี้ 0.5 μL บนแผ่นเป้าหมาย MALDI (250 fmol/จุด) สุดท้ายวัดตัวอย่างแห้งโดยใช้ตัวเลือก Linear TOF ที่มีใน SpiralTOF รุ่น JMS-S3000^TM ระบบเอ็มเอส

รูป 1 เกลียวTOF พร้อมตัวเลือก TOF เชิงเส้น

รูปที่ 2 สเปกตรัมมวลของมาตรฐานโปรตีน MALDI (a) เปปซิน (250 fmol/จุด)
(b) อัลบูมิน (250 fmol/จุด) (c) โคแนลบูมิน (250 fmol/จุด) (d) IgG (250 fmol/จุด)

ผลลัพธ์และการอภิปราย

สเปกตรัมมวล MALDI แสดงอยู่ในรูปที่ 2 สำหรับตัวอย่างโปรตีนแต่ละตัวอย่าง จุดสูงสุดที่สอดคล้องกับโมเลกุลโปรตอนที่มีประจุเดี่ยวและประจุคู่ถูกสังเกตที่ค่าที่คาดไว้ ม./ซ ค่าสำหรับโครงสร้างหลักของโปรตีนเหล่านี้

SpiralTOF พร้อมตัวเลือก Linear TOF

รูปร่างยอดดีในที่สูง ม./ซ ภูมิภาค
อัตราส่วนสัญญาณต่อสัญญาณรบกวนที่ยอดเยี่ยมสำหรับตัวอย่างเหล่านี้ในความเข้มข้นนี้ (250 ไมโครโมล)

ระบบ JEOL JMS-S3000 สามารถสร้างสเปกตรัมมวลคุณภาพสูงสำหรับโปรตีนที่สมบูรณ์ได้ นอกจากนี้ ระบบ TOF เชิงเส้นยังสามารถวัดโมเลกุลที่สมบูรณ์ได้สูงถึง ม./ซ 500,000 (ข้อมูลไม่ได้แสดงในตัวอย่างเหล่านี้)

PDF (262 KB)